ANÁLISIS INVITRO DE PRUEBAS CRUZADAS
HETERÓLOGAS ENTRE SANGRE BOVINA
Y CANINA
INVITRO ANALYSIS OF HETEROLOGOUS CROSS TESTS
BETWEEN BOVINE AND CANINE BLOOD
José Ricardo Salazar Prado
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
Lorena Elizabeth Chalco Torres
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
Matilde Lorena Zapata Saavedra
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
Katiuska Lilibeth Romero Cali
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
Johon Armando Luna Florín
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
Isis Gabriela Diaz Sánchez
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
pág. 9955
DOI: https://doi.org/10.37811/cl_rcm.v8i3.12131
Análisis Invitro de Pruebas Cruzadas Heterólogas entre Sangre Bovina
y Canina
José Ricardo Salazar Prado
1
jrsalazar_est@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0009-0000-7576-1573
Programa de Maestría en Medicina Veterinaria
mención Clínica y Cirugía de Pequeñas Especies
Universidad Técnica de Machala
Machala, El Oro, Ecuador
Lorena Elizabeth Chalco Torres
mlzapata@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0000-0003-4046-1736
Programa de Maestría en Medicina Veterinaria
mención Clínica y Cirugía de Pequeñas Especies
Universidad Técnica de Machala
Machala, El Oro, Ecuador
Matilde Lorena Zapata Saavedra
mlzapata@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0000-0002-8046-4328
Programa de Maestría en Medicina Veterinaria
mención Clínica y Cirugía de Pequeñas Especies
Universidad Técnica de Machala
Machala, El Oro, Ecuador
Katiuska Lilibeth Romero Cali
kromero14@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0000-0001-8550-8927
Escuela de Medicina Veterinaria
Universidad Técnica de Machala
Ecuador
Johon Armando Luna Florín
jluna@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0000-0001-8432-9070
Escuela de Medicina Veterinaria
Universidad Técnica de Machala
Ecuador
Isis Gabriela Diaz Sánchez
jrsalazar_est@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0000-0009-0009-5652
Universidad Técnica de Machala
Programa de Maestría en Medicina Veterinaria
mención Clínica y Cirugía de Pequeñas Especies
Machala, El Oro, Ecuador
RESUMEN
Las pruebas de compatibilidad cruzada son esenciales para determinar la compatibilidad serológica
entre un paciente y un donante de sangre en medicina veterinaria. Este estudio investigó la viabilidad
de la xenotransfusión entre bovinos y caninos mediante pruebas cruzadas in vitro. Se recolectaron
muestras de 115 perros y bovinos, procesándolas para pruebas de compatibilidad a diferentes
temperaturas. Los resultados demostraron que, en promedio, el 98% de los caninos mostraron entre un
75% y un 100% de compatibilidad con sangre bovina, sugiriendo la viabilidad de la xenotransfusión.
El análisis de pruebas cruzadas mayores y menores es esencial para evaluar la compatibilidad
serológica. La prueba cruzada mayor verifica la presencia de anticuerpos en el receptor contra los
glóbulos rojos del donante, mientras que la menor analiza los anticuerpos en el donante contra los
glóbulos rojos del receptor. Este estudio indicó una alta compatibilidad serológica, respaldando la
posibilidad de usar sangre bovina en transfusiones de emergencia para perros. La xenotransfusión de
sangre de bovinos a caninos podría ser una solución en emergencias cuando la sangre canina no está
disponible. Este enfoque podría mejorar significativamente la práctica clínica veterinaria, especialmente
en regiones con recursos limitados para bancos de sangre específicos para caninos. A pesar de los
resultados prometedores, aún faltan estudios detallados que evalúen los riesgos y beneficios a largo
plazo de las transfusiones heterólogas. Concluimos que, aunque las pruebas cruzadas son esenciales
para la seguridad transfusional, la investigación debe continuar para superar las limitaciones actuales y
optimizar la práctica de la xenotransfusión en medicina veterinaria.
Palabras: pruebas cruzadas, aglutinación, xenotransfusión, hemolisis
1
Autor principal
Correspondencia: jrsalazar_est@utmachala.edu.ec
pág. 9956
Invitro Analysis of Heterologous Cross Tests Between Bovine and
Canine Blood
ABSTRACT
Crossmatching tests are essential for determining serological compatibility between a patient and a
blood donor in veterinary medicine. This study investigated the viability of xenotransfusion between
bovines and canines through in vitro crossmatching tests. Samples from 115 dogs and bovines were
collected and processed for compatibility tests at different temperatures. The results demonstrated that,
on average, 98% of the canines showed between 75% and 100% compatibility with bovine blood,
suggesting the feasibility of xenotransfusion. The analysis of major and minor crossmatching tests is
essential for evaluating serological compatibility. The major crossmatch test verifies the presence of
antibodies in the recipient against the donor's red blood cells, while the minor test analyzes antibodies
in the donor against the recipient's red blood cells. This study indicated a high serological compatibility,
supporting the possibility of using bovine blood in emergency transfusions for dogs. Xenotransfusion
of bovine blood to canines could be a solution in emergencies when canine blood is not available. This
approach could significantly improve veterinary clinical practice, especially in regions with limited
resources for specific canine blood banks. Despite the promising results, detailed studies are still needed
to evaluate the long-term risks and benefits of heterologous transfusions. We conclude that, although
crossmatching tests are essential for transfusion safety, research must continue to overcome current
limitations and optimize the practice of xenotransfusion in veterinary medicine.
Keywords: cross-matching tests, agglutination, xenotransfusion, hemolysis
Artículo recibido 20 mayo 2024
Aceptado para publicación: 15 junio 2024
pág. 9957
INTRODUCCION
Las pruebas de compatibilidad cruzada pueden ayudar a determinar si un paciente tiene compatibilidad
serológica in vitro con un donante de sangre potencial. El conocimiento sobre los grupos sanguíneos
caninos, su inmunogenicidad y posibles incompatibilidades es esencial en la práctica clínica para llevar
a cabo transfusiones seguras, evitando tanto la sensibilización como las reacciones adversas a la
transfusión (Tocci & Ewing, 2009; Weinstein et al., 2012).
Las pruebas de compatibilidad cruzada se realizan para reducir el riesgo de reacciones hemolíticas
mediadas por el sistema inmunológico y de aloinmunización, extender la vida útil de los glóbulos rojos
del donante y aumentar la eficacia de la transfusión sanguínea (Aranidharan et al., 2018). Desde la
década de 1950, las transfusiones de sangre han sido una práctica común en la medicina veterinaria,
desempeñando un papel crucial en los cuidados intensivos y el tratamiento de emergencia en perros.
Aunque estas transfusiones son vitales para salvar vidas, no están exentas de riesgos. Por lo tanto, se
han establecido pautas y procedimientos de prueba para garantizar la seguridad de las transfusiones y
prevenir posibles complicaciones (Greenwalt et al., 1997; Kumar et al., 2017).
Una transfusión de sangre en caninos es crucial para tratar anemia severa, hemorragias agudas,
hemólisis, enfermedades de la médula ósea, coagulopatías y en cirugías de alto riesgo. Estas
transfusiones ayudan a mantener niveles adecuados de hemoglobina y restaurar el volumen sanguíneo,
asegurando la oxigenación tisular y previniendo complicaciones graves (Arndt, 2015; Hale, 2006).
Las primeras xenotransfusiones documentadas, que implicaban transfusiones entre diferentes especies,
fueron llevadas a cabo por Jean-Baptiste Denis en 1667, quien administró sangre de ternero a perros;
más tarde, se transfundió sangre de cordero y ternero a seres humanos (Roux et al., 2007). El campo de
la transfusión experimentó un cambio significativo con el descubrimiento de los grupos sanguíneos
humanos en 1900 (Landsteiner, 1900). A pesar de ello, el interés en la xenotransfusión persiste, con el
uso más reciente de sangre de cerdo para seres humanos (Cooper, 2003). Se ha demostrado que la
hemoglobina porcina polimerizada purificada se puede transfundir con éxito a perros sin provocar
reacciones de aglutinación o hemólisis (Jia et al., 2010).
En diferentes especies, la xenotransfusión, que implica la transferencia de sangre de una especie a otra,
se emplea en emergencias.
pág. 9958
El ganado vacuno podría ser una fuente ideal para este procedimiento en otras especies debido a su
capacidad de donar grandes volúmenes de sangre total (Smith et al., 2021). A pesar de los avances en
la medicina veterinaria, las transfusiones sanguíneas entre especies (heterólogas) continúan siendo un
área con limitaciones significativas debido a la falta de estudios exhaustivos. La incompatibilidad entre
diferentes tipos de sangre puede causar reacciones adversas graves. Por esta razón, es crucial seguir
investigando y profundizando en este campo para mejorar la seguridad y eficacia de las transfusiones
heterólogas (Birch & Yagi, 2016; Blais, 2016).
El objetivo principal de esta investigación es analizar in vitro las pruebas cruzadas entre la sangre de
bovinos y caninos para identificar posibles compatibilidades o incompatibilidades. Esta investigación
busca contribuir al conocimiento sobre la viabilidad de las transfusiones heterólogas y su impacto en la
medicina veterinaria, ofreciendo una base científica para mejorar la seguridad y eficacia de estos
procedimientos en situaciones clínicas.
MATERIALES Y METODOS
El estudio estuvo conformado por 115 perros cuyo criterio de inclusión es no haber recibido
transfusiones sanguíneas entre un lapso de dos meses. La colecta de muestras fue realizada a partir de
punción aséptica desde la vena cefálica, las cuales se transfirieron inmediatamente a un tubo con EDTA
y almacenadas a temperatura 5
o
C hasta su procesamiento en el Laboratorio de Patología de la
Universidad Técnica de Machala.
Se obtuvieron muestras de sangre de bovinos mediante la extracción de sangre de la vena yugular de
los animales en el camal municipal de Huaquillas, Ecuador. Estas muestras fueron recogidas en bolsas
para transfusiones de sangre estériles, específicamente utilizando el dispositivo comercial Intrafix®
SafeSet Blood Transfusion Set,. Luego, las muestras se mantuvieron a una temperatura de 5°C hasta su
transporte y procesamiento en el Laboratorio de Patología de la Universidad Técnica de Machala.
Procedimiento para prueba cruzada.
Para comenzar, se etiquetaron los tubos del donante y los receptores; luego se centrifugaron a 2500 rpm
durante 5 minutos para separar el plasma del paquete celular. Una vez separado el plasma y almacenado
en otro tubo de ensayo, se llevó a cabo el lavado de eritrocitos.
pág. 9959
Lavado de Eritrocitos
Primero, se añadieron 0,5 ml de solución salina a los tubos de ensayo previamente separados del plasma,
tanto del donante como de los receptores.
Preparación de la suspensión de glóbulos rojos
Se introdujeron 980 microlitros de solución salina al 2% en los tubos de ensayo.
Luego, se añadieron 20 microlitros de glóbulos rojos previamente lavados de cada receptor a la solución
preparada.
Este mismo procedimiento se repitió con los glóbulos rojos del donante, antes de llevar a cabo una
centrifugación.
A continuación, se llevaron a cabo las pruebas cruzadas tanto para el grupo sanguíneo mayor como para
el menor.
Prueba cruzada mayor
Se depositó una gota de sangre del donante (suspensión de glóbulos rojos) y una gota de plasma del
receptor en un portaobjetos a temperatura ambiente y se evaluó el grado de aglutinación a nivel
macroscópico como microscópico.
Este mismo procedimiento se repitió en portaobjetos a temperaturas ambiente, 37°C y 5°C.
Prueba cruzada menor
Para esta prueba, se colocó una gota de sangre del receptor (suspensión de glóbulos rojos) y una gota
de plasma del donante en un portaobjetos a temperatura ambiente, 37°C y 5°C, y luego se observó bajo
el microscopio para detectar la presencia de aglutinación.
La lectura de la muestra se llevó a cabo de la siguiente manera:
Primero, se examinó la muestra para detectar hemólisis observando la presencia de hemoglobina libre
en el sobrenadante, comparando el color del sobrenadante de la muestra con el del control.
Luego, se examinó la muestra para detectar hemaglutinación agitando suavemente el tubo y observando
la formación de un botón o agrupación de células.
Todas las pruebas que se consideraron macroscópicamente negativas para la hemaglutinación se
confirmaron microscópicamente con un aumento bajo (10X).
pág. 9960
El porcentaje de compatibilidad (ausencia de aglutinación) fue determinado de la siguiente manera:
Tabla I. Determinación de los porcentajes de compatibilidad cruzada in vitro entre receptores de sangre
y plasma caninos (115) y donantes de sangre y plasma de bovinos (115)
Prueba Mayor
Prueba Menor
Porcentaje de compatibilidad
Positivo
Positivo
0 %
Positivo
Negativo
25 %
Negativo
Positivo
75 %
Negativo
Negativo
100 %
RESULTADOS
Los resultados obtenidos en las diversas pruebas cruzadas in vitro se presentan en las Tablas II, III y IV.
Tabla II. Compatibilidad cruzada in vitro entre receptores de sangre y plasma caninos (115) y donantes
de sangre y plasma de bovinos (115) a temperatura ambiente.
Tabla III. Compatibilidad cruzada in vitro entre receptores de sangre y plasma caninos (115) y donantes
de sangre y plasma de bovinos (115) a temperatura de 37
o
C.
Tabla IV Compatibilidad cruzada in vitro entre receptores de sangre y plasma caninos (115) y donantes
de sangre y plasma de bovinos (115) a temperatura de 5
o
C.
DISCUSION
La identificación del tipo de sangre implica la detección de antígenos en la superficie celular, mientras
que las pruebas cruzadas determinan la presencia de anticuerpos en dicha superficie. Estas pruebas son
fundamentales para detectar posibles incompatibilidades en una transfusión de sangre, por lo que se
sugiere realizar ambas antes de cualquier transfusión sanguínea (Schaer, 2006).
Porcentaje de compatibilidad
75 %
50 %
25 %
0%
Caninos (n= 115)
48/115
0/115
0/115
2/115
Porcentaje Total (100%)
42 %
0 %
0 %
2%
Porcentaje de compatibilidad
100 %
75 %
50 %
25 %
0%
Caninos (n= 115)
57/115
56/115
0/115
0/115
2/115
Porcentaje Total (100%)
50 %
48 %
0 %
0 %
2%
Porcentaje de compatibilidad
100 %
75 %
25 %
0%
Caninos (n= 115)
54/115
59/115
1/115
1/115
Porcentaje Total (100%)
47 %
51 %
1 %
1%
pág. 9961
Este estudio in vitro demostró que, en promedio, el 98% de los caninos analizados presentaron entre un
75% y un 100% de compatibilidad con sangre bovina a las diferentes temperaturas como lo indica la
tabla II, III, IV, lo que sugiere la viabilidad de la xenotransfusión sanguínea. A medida que avanza la
investigación sobre transfusiones seguras en perros, se considera la viabilidad de utilizar transfusiones
heterólogas. Estas transfusiones ofrecen la posibilidad de asistir a más pacientes en situaciones de
emergencia cuando no hay disponibilidad de sangre canina. Un estudio con dos grupos de 10 perros
mostró resultados prometedores: el primer grupo recibió transfusiones de sangre O+ humana sin
experimentar reacciones adversas, observándose una mejora notable en el hematocrito. En contraste,
los perros del segundo grupo fueron transfundidos con sangre canina sin tipificar y, aunque no se
registraron reacciones de incompatibilidad, se observó un hematocrito promedio más bajo, indicando
la necesidad de realizar más investigaciones para evaluar las transfusiones heterólogas y considerar los
riesgos y beneficios asociados (Zapata et al., 2017).
Las pruebas cruzadas, conocidas como crossmatching, verifican la existencia de anticuerpos en el
plasma del donante y del receptor. Son esenciales en situaciones donde existe riesgo de
incompatibilidad, como en gatos cuyo grupo sanguíneo no puede ser determinado o en animales que
hayan recibido transfusiones previas. La prueba cruzada mayor evalúa si el receptor posee anticuerpos
dirigidos contra los glóbulos rojos del donante, mientras que la prueba cruzada menor verifica si el
plasma del donante contiene anticuerpos contra los glóbulos rojos del receptor. Es crucial incluir una
reacción de control donde se mezclen los glóbulos rojos y el plasma del receptor. Si se observa hemólisis
o aglutinación en la prueba cruzada mayor, la transfusión no podrá realizarse debido a la presencia de
anticuerpos en el receptor contra los glóbulos rojos del donante. En cambio, si se detecta hemólisis o
aglutinación en la prueba cruzada menor, la transfusión puede realizarse con precaución, ya que indica
la presencia de anticuerpos en el donante contra los glóbulos rojos del receptor, aunque la cantidad de
anticuerpos presentes no suponga un riesgo grave (Giger, 2000; Haldane et al., 2004).
Los glóbulos rojos bovinos son robustos y resistentes a la lisis mediada por el sistema complemento
(Johnstone et al., 2004). En un estudio, se administró sangre completa de bovino a dos cabras sanas,
seguidas de un seguimiento para detectar posibles efectos adversos y la presencia de glóbulos rojos
bovinos después de la transfusión xenogénica. Luego, se evaluó la compatibilidad entre 15
pág. 9962
combinaciones de sangre caprina y bovina mediante pruebas cruzadas. Ambas cabras toleraron la
transfusión xenogénica, aunque se observaron reacciones transitorias. De las 15 combinaciones
evaluadas, 11 fueron compatibles en las pruebas cruzadas mayores y todas mostraron compatibilidad
en las menores (Smith et al., 2021).
En Ecuador, la falta de bancos de sangre dedicados a los caninos y la falta de conciencia entre los dueños
de mascotas sobre la importancia de convertir a sus animales en donantes representan desafíos
significativos. La creciente cantidad de mascotas que acuden a las clínicas veterinarias con diversos
tipos de anemia, causadas por distintos factores, pone en riesgo la salud y el bienestar de los animales
(Zapata et al., 2017).
Existe un interés creciente en métodos de transfusión sanguínea menos convencionales, que no se basan
en el almacenamiento de sangre, como la recuperación de células autólogas, la transfusión y la
xenotransfusión. Estos métodos se perfilan como alternativas a las transfusiones tradicionales. La
xenotransfusión ofrece una opción para manejar temporalmente la anemia, permitiendo la realización
de procedimientos diagnósticos o quirúrgicos, así como la recolección y transfusión de sangre adecuada.
Aunque presenta riesgos potenciales y no iguala el rendimiento de las transfusiones homólogas o
autólogas, se considera una parte integral de la práctica de la medicina veterinaria de transfusión
(Kisielewicz et al., 2014).
La administración de sangre de ternero a perros, seguida por la transfusión de sangre de cordero y
ternero a humanos, ha sido documentada (Roux et al., 2007). Además, se ha logrado transfundir con
éxito hemoglobina porcina polimerizada purificada a perros, sin que se presenten reacciones de
aglutinación o hemólisis (Jia et al., 2010).
Debido a la rara ocurrencia de aloanticuerpos clínicamente significativos en perros, muchos veterinarios
consideran opcional o innecesaria la prueba cruzada antes de la primera transfusión de sangre en un
paciente canino. De hecho, una encuesta en línea realizada en 73 hospitales veterinarios de referencia o
enseñanza mostró que solo 11 de 73 (15%) realizaban una prueba cruzada para todos los perros antes
de la transfusión. Sin embargo, 72 de 73 (99%) informaron que realizan una prueba cruzada de 3 a 5
días después de la primera transfusión a un perro (Vap, 2014; Tiwari, 2009; Brown, 2012; Jagodich &
Holowaychuk, 2016).
pág. 9963
En la década de 1960, se documentaron varios estudios sobre la transfusión de sangre de perro a gatos
(Bovens & Gruffydd-Jones, 2013). Más recientemente, se reportó un caso único (Gowan, 2004). No se
registraron reacciones adversas graves inmediatas, posiblemente porque los gatos carecen de
anticuerpos contra los antígenos de los glóbulos rojos del perro. Sin embargo, se detectaron anticuerpos
entre 4 y 7 as después de la primera transfusión, según pruebas de aglutinación en portaobjetos y
ensayos de hemólisis in vitro. Además, la vida útil de los glóbulos rojos transfundidos fue inferior a 4
días (Clark & Kiesel, 1963). La repetición de la transfusión con sangre de perro más de 6 días después
de la primera resultó en anafilaxia, con una tasa de mortalidad superior al 66% (Bovens & Gruffydd-
Jones, 2013). La xenotransfusión de sangre de perro a gatos podría considerarse en emergencias
genuinas donde no haya otra opción, siempre y cuando el gato no haya sido transfundido previamente
con sangre de perro. Esto podría brindar tiempo para llevar a cabo diagnósticos o adquirir productos
sanguíneos adecuados.
Existe un estudio en reportar la compatibilidad de la prueba cruzada mayor entre la sangre de conejos
receptores, conejos donantes y los cuatro tipos principales de sangre de perros y gatos. No se detectaron
hemólisis ni aglutinación en ninguna de las pruebas cruzadas mayores entre donantes y receptores de
conejo, lo que sugiere una alta probabilidad de compatibilidad serológica in vivo entre conejos. Aunque
no se observó hemólisis, sí se presentó aglutinación microscópica a macroscópica en todas las pruebas
cruzadas mayores entre donantes caninos o felinos y receptores de conejo. Los donantes caninos
mostraron un riesgo 1.4 veces mayor de aglutinación macroscópica en comparación con los donantes
felinos, indicando que los conejos poseen aloanticuerpos naturales contra los aloantígenos de glóbulos
rojos de perros y gatos (Dannemiller et al., 2024).
Las pruebas de compatibilidad cruzada mayor y menor evalúan la compatibilidad serológica in vitro
entre un receptor de transfusión sanguínea y un donante potencial mediante la evaluación de hemólisis
y aglutinación. La hemólisis se produce cuando los aloanticuerpos activan el complemento, provocando
la disrupción de la membrana de los glóbulos rojos. La aglutinación se debe a la unión de los
aloanticuerpos a los aloantígenos de los glóbulos rojos, causando su entrelazamiento. La prueba de
compatibilidad cruzada mayor examina los aloanticuerpos presentes o inducidos en el suero o plasma
del receptor contra los glóbulos rojos del donante, mientras que la prueba de compatibilidad cruzada
pág. 9964
menor evalúa los aloanticuerpos presentes o inducidos en el suero o plasma del donante contra los
glóbulos rojos del receptor. Si se observa hemólisis o aglutinación en alguna de las pruebas, esto puede
indicar una posible incompatibilidad serológica in vivo entre el receptor y el donante de sangre (Tocci
et al., 2009; Weinstein & Sink, 2012; Giger, 2015; Zaremba et al., 2019). Aunque la prueba de
compatibilidad cruzada menor se considera menos crucial para la terapia con componentes sanguíneos,
se recomienda realizarla al transfundir sangre entera o plasma (Giger, 2015).
CONCLUSIONES
Las pruebas de compatibilidad cruzada son cruciales para asegurar transfusiones seguras en medicina
veterinaria, identificando potenciales incompatibilidades serológicas entre donantes y receptores
caninos. Este estudio evidencia la viabilidad de la xenotransfusión entre bovinos y caninos, mostrando
resultados prometedores en la compatibilidad in vitro y sugiriendo una posible aplicación en situaciones
de emergencia. No se encontraron diferencias significativas en la aglutinación a diferentes temperaturas,
lo cual refuerza la consistencia de los resultados. Se destaca la necesidad de seguir investigando en este
campo para optimizar la seguridad y eficacia de las transfusiones heterólogas y así mejorar la práctica
clínica veterinaria.
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