LA CURCUMINA RESTABLECE LOS NIVELES
DE P53 EN CÉLULAS DERIVADAS DE CÁNCER
CERVICOUTERINO EN UN MODELO IN
VITRO E IN VIVO
CURCUMIN RESTORES P53 LEVELS IN CERVICAL
CANCER-DERIVED CELLS IN AN IN VITRO AND
IN VIVO MODEL
Vianey Berenice Rodríguez Donat
Instituto Politécnico Nacional, México
Carlos César Patiño Morales
Hospital Infantil de México Federico Gómez, México
Ricardo Jaime Cruz
Hospital Infantil de México Federico Gómez, México
Villavicencio Guzmán Laura
Hospital Infantil de México Federico Gómez, México
Marcela Salzar García
Hospital Infantil de México Federico Gómez, México
pág. 4800
DOI: https://doi.org/10.37811/cl_rcm.v8i6.15199
La Curcumi na Restablece los Niveles de p53 en Células Derivadas de Cáncer
Cervicouterino en un Modelo In Vitro e In Vivo
Vianey Berenice Rodríguez Donat 1
vrdzdonat@gmail.com
https://orcid.org/0009-0007-4663-9757
Instituto Politécnico Nacional
México
Carlos César Patiño Morales
carloscesarpmorales@gmail.com
https://orcid.org/0000-0003-1995-0308
Hospital Infantil de México Federico Gómez
México
Ricardo Jaime Cruz
ricardo.jaime.cruz@gmail.com
https://orcid.org/0000-0002-0403-537X
Hospital Infantil de México Federico Gómez
México
Laura Villavicencio Guzmán
lauvillavi@gmail.com
https://orcid.org/0000-0002-8314-8996
Hospital Infantil de México Federico Gómez
México
Marcela Salzar García
msalazar@himfg.edu.mx
https://orcid.org/0000-0001-5318-8148
Hospital Infantil de México Federico Gómez
México
RESUMEN
La curcumina es un fitoquímico natural con propiedades antineoplásicas, incluida la modulación de
p53. Se ha sugerido que apuntar a la actividad de p53 es una estrategia importante en la terapia contra
el cáncer. El propósito de este estudio fue describir el efecto de curcumina sobre p53 en líneas celulares
derivadas de cáncer cervicouterino y en tumores inducidos in ovo. Se expusieron células HeLa y SiHa
a curcumina. Se realizó evaluación de la viabilidad celular por MTT y TUNEL y se cuantificó la
expresión de p53 mediante western blot, los resultados indican un efecto importante en la disminución
de la viabilidad de las células que recibieron tratamiento y que hay un incremento de los niveles de p53,
además aquí demostramos mediante ensayos de pulso y casa que la curcumina aumenta la vida media
de p53. En muestras obtenidas de tumores inducidos in ovo también se observó un aumento en los
niveles de p53 por inmunohistoquímica. El efecto citotóxico de la curcumina en las células de cáncer
de cuello uterino se relacionó también con la activación de la vía Keap1/Nrf2. Nuestros hallazgos
sugieren que el uso de curcumina puede reactivar la vía p53 en células cancerosas con p53 de tipo
silvestre.
Palabras clave: curcumina, cáncer, p53, CaCu
1
Autor principal
Correspondencia: msalazar@himfg.edu.mx
pág. 4801
Curcumin Restores p53 Levels in Cervical Cancer-Derived Cells in an In
Vitro and in Vivo Model
ABSTRACT
Curcumin is a natural phytochemical with antineoplastic properties, including modulation of p53. It has
been suggested that targeting p53 activity is an important strategy in cancer therapy. The purpose of
this study was to describe the effect of curcumin on p53 in cervical cancer-derived cell lines and in ovo-
induced tumors. HeLa and SiHa cells were exposed to curcumin. Cell viability assessment was
performed by MTT and TUNEL and p53 expression was quantified by western blot, the results indicate
a significant effect in decreasing the viability of the cells that received treatment and that there is an
increase in p53 levels, furthermore here we demonstrate by pulse and house assays that curcumin
increases the half-life of p53. In samples obtained from in ovo induced tumors we also observed an
increase in p53 levels by immunohistochemistry. The cytotoxic effect of curcumin on cervical cancer
cells was also associated with activation of the Keap1/Nrf2 pathway. Our findings suggest that the use
of curcumin can reactivate the p53 pathway in cancer cells with wild-type p53.
Keywords: curcumin, cancer, p53, cervical cancer
Artículo recibido 10 octubre 2024
Aceptado para publicación: 15 noviembre 2024
pág. 4802
INTRODUCCIÓN
El cáncer es un grupo diverso de enfermedades que se caracterizan por el crecimiento anormal de células
y representa un importante problema mundial. Por ello, la búsqueda de alternativas terapéuticas contra
las células tumorales ha sido un gran reto que ha llamado la antención e interés científico y comercial
en el descubrimiento de fármacos anticancerígenos potentes, seguros y selectivos (Andreani et al., 2024;
Matsuo, 2023; Pandey & Rizvi, 2009). Entre ellos, los antioxidantes son moléculas con potencial
terapéutico ya que tienen la capacidad de neutralizar especies reactivas de oxígeno pero también se les
han atribuido propiedades antitumorales (Chikara et al., 2018; Hecht et al., 2024; Houghton et al.,
2016). Un ejemplo de estos compuestos naturales con este potencial es la curcumina, obtenida de las
raíces de la planta Curcuma longa. Estructuralmente la curcumina es una molécula con regiones polares
centrales y flanqueantes separadas por un segmento lipofílico de metionina. Además, tiene propiedades
químicas distintivas, entre estas la presencia de compuestos α,β–insaturados (aceptores de Michael) que
facilitan las interacciones intermoleculares (Heger et al., 2014; Kasi et al., 2016; Slika & Patra, 2020).
Las actividades antitumorales de la curcumina han sido demostradas por algunos grupos de
investigación (Devassy et al., 2015; Goel et al., 2008; Hu et al., 2024; Yuan et al., 2023). Se ha
demostrado que puede activar inhibidores de quinasas dependientes de ciclina, por lo tanto reprime el
crecimiento de numerosas líneas de células cancerosas por la vía de la fosfatidilinositol 3-quinasa
(PI3K/Akt), Ras y vías de β-catenina (Mishra & Das, 2015). La curcumina también es un poderoso
antioxidante porque activa la vía Keap1/Nrf2 en microambientes oxidantes (Prasad et al., 2014;
Serafini et al., 2019). La vía Nrf2 está regulada por Keap1 al mediar su degradación, pero cuando las
células están expuestas a electrófilos u oxidantes, Nrf2 se estabiliza y se transloca al núcleo, uniéndose
al elemento de respuesta antioxidante (ARE) ubicado en la región promotora de genes antioxidantes y
regula positivamente su transcripción. Nrf2 funciona como un factor de transcripción que promueve la
expresión de enzimas antioxidantes como la NAD quinona oxidoreductasa 1(Adinolfi et al., 2023; Baird
& Yamamoto, 2020; Richardson et al., 2015; Theodore et al., 2008). Esta proteína tiene múltiples
funciones, incluyendo la neutralización de especies reactivas de oxígeno, la desintoxicación de quinonas
y la estabilización de proteínas por ejemplo; hay un informe que muestra que NQO1 puede interactuar
con p53 causando su estabilización y por lo tanto la activación de la vía Keap1/Nrf2 podría implicar la
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estabilización de p53 (Asher et al., 2002; Patiño-Morales et al., 2020; Stefanson & Bakovic, 2014).
La proteína p53 es un producto de un gen supresor de tumores que puede bloquear la progresión del
ciclo celular cuando el ácido desoxirribonucleico (ADN) está dañado (Y. Liu et al., 2024; Sullivan et al.,
2012). Se localiza en el núcleo, donde funciona como factor de transcripción de secuencias de ADN
específicas en genes como p21. La activación de p53 puede activar diferentes vías que resultan en
apoptosis, detención del ciclo celular, reparación del ADN o senescencia (Blattner, 2008; Engeland,
2022). Debido a su importancia biológica, las mutaciones en el gen supresor de tumores TP53 se
observan en más del 50% de todos los cánceres humanos, sin embargo, hay tumores que presentan p53
de tipo silvestre como en el cáncer cervicouterino y por lo tanto se vuelve un potencial blanco
terapéutico. (Hassin & Oren, 2023; Leroy et al., 2014). En este trabajo investigamos el incremento en
los niveles y la estabilidad de p53 mediados por la curcumina. Demostramos que la curcumina no solo
promueve el incremento de los niveles de p53 en líneas celulares y tumores inducidos in ovo, sino que
además la curcumina es necesaria para estabilizar p53. Este compuesto natural podría tener un gran
potencial como coadyuvante a la terapia convencional del cáncer en tumores con p53 de tipo silvestre.
METODOLOGÍA
Sustancias químicas y reactivos
Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) (Sigma Aldrich CAS57360-69-7),
curcumina (Sigma Aldrich C1386), Dulbecco's Modified, Eagle medio alto en glucosa (DMEM 11965–
084), suero fetal bovino (Gibco10500056), verseno (Gibco 15040066), azul tripano (Sigma Aldrich
CAS72-57-1), recuperador de antígenos Diva Decloaker 10x (BioCare Medical SKU:DV2004),
bloqueador universal de proteínas libre de suero (Dako X0909), DAB cromógeno + DAB amortiguador
de sustrato (Dako GV825). Anticuerpo monoclonal de ratón anti-p53 Pab 1801 (sc-98), anti-GAPDH
(sc-13179) anti-Lámina A/C (sc-7293), anticuerpo monoclonal anti-ratón m-IgG k BP-HRP (sc-
516102). PageRulerTM Prestained Protein Ladder (Thermo Fisher Scientific 26616), cóctel inhibidor de
proteasa comprimidos sin EDTA (Sigma Aldrich s8830), parafina (Tissue-Tek VIP ), kit NE-PERTM
Nuclear and cytoplasmic extraction reagents (Thermo Fisher Scientific Cat. No. 78835), kit de TUNEL
(CAT ab206386, Abcam), vectashield (Vector Laboratories CAT11887), paraformaldehído (Santa Cruz
Biotecnology CAS89277-65-6), DMSO (Santa Cruz Biotecnology CAS67-68-5), Tris (Sigma Aldrich
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CAS 77-86-1), NaCl (Sigma Aldrich CAS 7647-14-5), fosfato de sodio (Sigma Aldrich CAS 10049-
21-5), Cicloheximida (Sigma Aldrich CAS 66-81-9), Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher
Scientific CAT23227), solucion de peróxido de hidrógeno (Sigma Aldrich CAS7722-84-1).
Cultivo de lineas celulares
Las líneas celulares HeLa y SiHa fueron adquiridas de la American Type Culture Collection y se
cultivaron en medio DMEM suplementado con suero fetal bovino al 10%. Todas las líneas celulares se
cultivaron a 37°C en una incubadora con CO2 al 5%. A los cultivos celulares se les dio tratamiento con
curcumina a concentraciones de 10 μM y 20 μM durante 24 horas, después de la incubación se retiró
el medio de cultivo, se realizaron dos lavados de 5 minutos y las células se fijaron con paraformaldehído
durante 15 minutos posteriormente se observaron en un microscopio de campo claro para evaluar los
cambios morfológicos postratamiento.
Ensayos de viabilidad celular
La viabilidad celular se determinó mediante el ensayo MTT. Se sembraron las células HeLa y SiHa
(5000 células/pozo) en una placa de 96 pozos, se trataron con curcumina 10 μM y 20 μM y se incubaron
a 37°C durante 24 h. Después del tiempo de incubación se retiró el medio y se agregaron 10 µl por
pozo de solución de MTT (5 mg/ml), las células se incubaron a 37 °C durante 4 horas y los cristales de
formazán se disolvieron utilizando 50 µl de DMSO. La viabilidad celular se determinó midiendo la
absorbancia a 570 nm en un lector de microplacas multimodo híbrido Synergy H1 (BioTek, Winooski,
VT, USA).
Fraccionamiento celular
Para la detección de Nrf2 en el núcleo el fraccionamiento celular se realizó según el protocolo del kit
NE-PERTM Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents. Los cultivos celulares de ambas líneas se
trataron con curcumina 10 μM y 20 μM, se lavaron con PBS y se colectaron 1x106 células por cada
condición evaluada (control y experimental) que se resuspendieron en tampón CER I. Las células se
agitaron vigorosamente y luego se añadió tampón CER II. Las células se centrifugaron a 14,000 rpm
durante 5 min. El sobrenadante se recuperó y almacenó como extracto citoplasmático. El sedimento se
resuspendió en tampón NER y se agitó vigorosamente cada 10 min durante 40 min.
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Finalmente, las células se centrifugaron a 14,000 rpm durante 10 min. El sobrenadante se recuperó y
almacenó como extracto nuclear.
TUNEL
Las células SiHa y HeLa fueron sembradas en cubreobjetos y tratadas con curcumina (10 μM y 20 μM)
durante 24 horas posteriormente se fijaron en formaldehído al 4% a temperatura ambiente durante 10
minutos y se lavaron dos veces con PBS 1X a pH 7.2. La apoptosis de las células se detectó utilizando
un kit de TUNEL de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Finalmente, las muestras se
montaron con medio de montaje Vectashield® que contenía 50 µg/ml de DAPI para marcaje nuclear
durante 5 minutos a temperatura ambiente. Las células TUNEL positivas presentan núcleos verdes
cuando se visualizan bajo un microscopio de fluorescencia.
Western blot
Los lisados de las muestras de células se extrajeron con un buffer de lisis compuesto por Tris 50 mM,
pH 7.6, NaCl 150 mM, Nonidet P-40 al 1 %, fosfato de sodio 10 mM y un cóctel inhibidor de proteasa
en tableta completa por 100 ml de tampón. La concentración en los lisados se cuantificó utilizando un
kit de de ácido bicinconínico en el cual se utiliza albúmina sérica bovina como estándar. Se sometieron
cantidades iguales de proteína total a electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio
al 10 % (SDS-PAGE) y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa, seguido de incubación durante
la noche a 4 °C utilizando la siguiente dilución de anticuerpos primarios: anti-p53 (1: 100), anti-lamina
A/C (1:500), anti-GAPDH (1:1000), seguido de incubación con anticuerpo secundario acoplado a HRP
en solución de bloqueo durante 1 hora a temperatura ambiente, se utilizó la siguiente dilución: anti-
ratón (1:1000). Finalmente los niveles de expresión de proteínas se visualizaron con un escáner que
detecta la quimioluminiscencia Li-COR C-DiGit
Ensayo de pulso y caza
Las células se sembraron en placas p35 a una densidad de 1.5×105 células/placa y se trataron con
curcumina a una concentración de 20μM durante 24 h, se eliminó el medio que contenía el tratamiento
y las células se lavaron con PBS, continuando con el tratamiento con CHX en una concentración de 50
μg/ml como ha sido reportado anteriormente (Hochstrasser, 1995; Yewdell et al., 2011), (la CHX es
un inhibidor de la síntesis de proteínas) se colectaron alícuotas de células cada diez minutos a partir de
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0 min, 10 min, 20 min, y así sucesivamente hasta completar 60 min inmediatamente después de la
adición del compuesto, las células se lisaron con el buffer de lisis descrito previamente, se analizó la
abundancia de proteína p53 en cada momento mediante western blot.
Inducción de tumores in ovo
Se obtuvieron huevos fecundados de gallina de una granja local (ALPES, Puebla, México) y se
incubaron con volteo automático a 37.8°C a humedad relativa del 80% durante 8 días. Los cascarones
del huevo fueron desinfectados con alcohol al 70% y se les abrió una ventana circular en el cascarón de
2cm de diámetro, seguido del retiro de la membrana testácea, dejando expuesta la membrana
coriolanatoidea (CAM). Las células que se colocaron en la CAM se procesaron de la siguiente manera;
cuando los cultivos alcanzaron una confluencia del 70% se retiró el medio, se relizó un lavado con PBS
y posteriormente se agregó una solución 1:1 de verceno y tripsina para desprender las células de la caja
y se incubaron a 37°C durante 10 minutos, pasado el tiempo se inhibió la actividad de la tripsina con
medio suplementado con suero fetal bovino, se colocó la suspensión en tubos Eppendorf, se centrifugó,
se retiró el sobrenadante y se resuspendió el botón celular en PBS, las células se contaron por el método
de exclusión con azul tripano, utilizando una cámara de Neubauer. Se tomo la cantidad necesaria para
reunir 3 x 10 6 células y se resuspendieron en matrigel esta suspensión de células en matrigel se
colocaron en la CAM de embrión pollo previa leve laceración de la CAM. Se cubrió la ventana con
cinta adhesiva y se incubó a 37.8°C en incubadora estática durante 4 días. Se prepararon dos soluciones
de curcumina a 20 μM y 40 μM. Se colocó un volumen de 100 microlitros de solución en cada tumor
inducido en la CAM de embrión de pollo, se incubaron por 2 días a 37.8°C en incubadora en
condiciones estáticas. Pasado el tiempo de tratamiento, los tumores dentro del huevo fueron
fotografiados para posteriormente hacer la resección y fijarlos en paraformaldehído (al 4% en PBS pH
7.2) durante 24 horas, por último se retiró el paraformaldehído y los tumores se colocaron en PBS pH
7.2.
Técnica histológica
Los tumores fijados fueron desidratados a través de una serie de alcoholes (30-100%), se sumergieron
en xileno y se embebieron en parafina, se realizaron cortes de 5µm y se montaron en laminillas cubiertas
con poli-L-lisina para su posterior análisis.
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Inmunohistoquímica
La expresión de los niveles de proteína fueron estimados por inmunohistoquímica usando un anticuerpo
primario contra p53(1:100). Las muestras fueron incubadas con el anticuerpo primario a lo largo de la
noche a 4°C para al día siguiente ser tratados con el anticuerpo secundario anti mouse-HRP (1:200).
Las muestras fueron tratadas con Diaminobencidina (DAB). Posteriormente se realizó una contratinción
nuclear con hematoxilina de Harris. Finalmente, las muestras fueron montadas y vistas en el
microscopio (Leica Microsystem, Wetzier, Germany).
Diseño y tipo de estudio
Por el empleo de los sujetos de estudio y captación de la información: Experimental y prospectivo, por
la medición del fenómeno en el tiempo: Transversal, por la presencia de un grupo control: Comparativo.
Criterios de inclusión: Embriones de pollo de 8 días de incubación con inducción efectiva de tumores
en la membrana corioalantoidea (MCA).
Criterios de exclusión y eliminación: Las muestras con concentraciones bajas de proteínas y embriones
de pollo con malformaciones congénitas.
Análisis estadístico
Todos los ensayos fueron realizados por triplicado. Se utilizó el software JAMOVI para el análisis y las
gráficas. Se realizó la prueba de Shapiro Wilk para normalidad, prueba de Levene para homogeneidad
de varianzas y ANOVA de un factor junto con la prueba Post Hoc de Tukey. También se utilizó la
prueba t de estudent para realizar la comparación de dos grupo. Una p< 0.05 se tomó como
estadísticamente significativa.
Consideraciones éticas y de bioseguridad:
El trabajo realizado con animales cumplió con lo establecido en la Ley General de Salud en Materia de
Investigación para la Salud vigente. El manejo del modelo animal (embriones de pollo) se llevó a cabo
de acuerdo a la Guia para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (8va edición, 2017) y a la
Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999 para el Uso y Cuidado de los Animales de Laboratorio.
Se cumplió con lo que estipula la NOM-087-ECOL-SSA1-2002 (Protección ambiental - Salud
ambiental- Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones de manejo). La
clasificación y manejo de los desechos CRETI que se generaron se realizó de acuerdo a lo que dicta la
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Norma Oficial Mexicana NOM-052-SEMARNAT-2005 (que establece las características, el
procedimiento de identificación, clasificación y los listados de residuos peligrosos).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
La curcumina tiene un efecto importante sobre la viabilidad celular
Existen reportes que hacen referencia a los efectos benéficos de la curcumina en la salud (Liu et al.,
2022), entre ellos su efecto antitumorales en diferentes tipos de cánceres (Alhasawi et al., 2022). Para
evaluar el efecto de la curcumina sobre la viabilidad celular se realizó un ensayo MTT. El tratamiento
con curcumina induce una disminución significativa en la viabilidad celular de una manera dosis
dependiente tanto el línea celular SiHa (Figura 1 A) como en la línea celular HeLa (Figura 1 B). Se
determinó que la dosis de 20 μM es la mejor para dar tratamiento a las céluas porque no ocasiona muerte
total de los cultivos y por lo tanto permite realizar ensayos posteriores, a partir de la dosis de 40 μM en
adelante se observan muchas células muertas y el material obtenido no alcanza para realizar otros
experimentos. Se evaluaron los cambios morfológicos en las células después del tratamiento con
curcumina y se observaron características propias de la muerte celular, como pérdida de la adhesión,
pérdida de comunicación célula-célula y aparición de cuerpos apoptóticos (Figura 2 A-B). Para
confirmar la muerte celular por apoptosis se realizó el ensayo de TUNEL en las células tratadas como
se describe anteriormente. El tratamiento con curcumina provoca que las células sean positivas a
TUNEL (indicativo de apoptosis) en comparación con los controles sin tratamiento tanto en células
SiHa (figura 3 A-F) como en células HeLa (Figura 3 G-L). Los resultados corresponden con otros
trabajos previamente reportados en donde se demuestra el efecto antitumoral de la curcumina in vitro
en células provenientes de diferentes tumores (Rainey et al., 2020).
La curcumina incrementa los niveles y la vida media de p53
Se realizó un western blot de protínas extraídas a partir de células que fueron tratadas con curcumina y
se observó que el tratamiento a una concentración de 20 μM aumenta los niveles de p53 (Figura 4 A).
p53 desempeña un papel central en la protección del genoma y la prevención de la transformación
celular (Lavin & Gueven, 2006). A pesar de que las mutaciones en el gen p53 ocurren en el 50% de los
cánceres, las células de cáncer cervical retienen p53 de tipo silvestre y funcional (Srivastava et al.,
1992). Por lo tanto, las líneas celulares cancerosas con p53 silvestre pueden reactivar las vías
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desencadenantes de la muerte celular y disminuir la viabilidad celular (Goodwin & DiMaio, 2000). Por
lo tanto, la restauración de p53 puede ser una estrategia terapéutica prometedora, sin embargo, la
estabilidad de p53 es un factor importante para la vía de reactivación. Se ha reportado anteriormente
que la vida media de p53 es de 20 minutos en condiciones fisiológicas (Sullivan et al., 2018) Para
evaluar el efecto de la curcumina sobre la vida media de p53, analizamos su estabilidad después de
tratamientos con curcumina o cicloheximida, un conocido inhibidor de la síntesis de proteínas
(Buchanan et al., 2016). Se encontró que la estabilidad de p53 de las células HeLa y SiHa sin tratamiento
con curcumina fue de 20 minutos, sin embargo, cuando las células se trataron con 20 μM de curcumina,
se detectó la proteína p53 hasta los 60 minutos ( Figura 4B). Estos resultados sugieren que la curcumina
puede mejorar la vida media de p53 de las células tumorales.
Estudios pervios han demostrado que la curcumina es capaz de activar la vía Keap1/Nrf2 (Pulido-Moran
et al., 2016). Previamente se ha demostrado que la activación de esta vía es necesaria para la
estabilización de p53 (Patiño-Morales et al., 2020). Para determinar la participación de la curcumina en
la activación de la vía Keap1/Nrf2 en nuestro modelo, evaluamos la translocación de Nrf2 al núcleo en
líneas celulares de cáncer de cuello uterino Hela y SiHa en respuesta al tratamiento con curcumina.
Nuestros resultados confirman la inmunodetección de Nrf2 en el extracto nuclear después del
tratamiento en una concentración de 20 μM con curcumina (Figura 4C) un evento que indica la
activación de la vía Keap1/Nrf2. En conjunto, estos resultados indican que la curcumina puede tener un
papel importante en la activación de la vía p53 dependiente de la vía Keap1/Nrf2.
La curcumina disminuye el tamaño de tumores inducidos in ovo e incrementa p53 en tumores
En orden de confirmar el efecto antitumral de la curcumina visto previamente en el modelo in vitro se
indujeron tumores en la membrana corioalantoidea de embrión de pollo, los cuales fueron tratados con
curcumina. Se observa que la curcumina disminuye el tamaño de los tumores generados con ambas
lineas celulares (Figura 5 A), además los tumores se retiraron para realizar la inmunodetección de p53
y se observó una mayor expresión de esta molécula en los tumores con tratamiento (++) comparados
con los tumores sin tratamiento (+) (Figura 5B). El modelo in ovo pude ser un buen modelo para estudiar
la biología del desarrollo de tumores (Schneider-Stock & Ribatti, 2021) pero hasta ahora no se había
ulizado para evaluar en el efecto de la curcumina en tumores inducidos con células que provienen de
pág. 4810
cáncer cervicouterino. Los resultados concuerdan con otros reportados previamente en donde el
tratameinto con curcumina disminuye el tamaños de tumores de diferentes tipos de cáncer pero en
modelo de ratón (Bimonte et al., 2015; Luo et al., 2011; Yılmaz et al., 2019).
ILUSTRACIONES, TABLAS, FIGURAS.
Figura 1. Efecto de la curcumina en la viabilidad de células SiHa y HeLa.
La viabilidad celular se evaluó utilizando MTT. Los valores se representan como medias ± DE de tres
experimentos independientes. El control representa las células sin tratamiento. Las diferencias
estadísticas en A y B se determinaron mediante ANOVA de una vía y la prueba de comparación múltiple
de Tukey; (***) p < 0,005.
Figura 1. Cambios morfológicos en células tratadas con curcumina
pág. 4811
Las células del control, sin tratamiento (A y B) permanecen completamente adheridas y comunicadas
entre ellas. Por el contrario, los cultivos expuestos al tratamiento (C y D) denotan cambios que hacen
notables la toxicidad de la curcumina (20 µM) ya que las células comienzan a perder adhesión y
comunicación entre ellas, empiezan a circularizarse y se observa la presencia de cuerpos apoptóticos.
“Cur” representa el tratamiento con curcumina
Figura 2. El tratamiento con curcumina promueve la apoptosis de células SiHa y HeLa.
(A-C) Control sin tratamiento de las células SiHa, (D-F) Células SiHa tratadas con 20µM de
curcumina. (G-I) Control sin tratamiento de células HeLa, (J-L) Células HeLa tratadas con 20µM de
curcumina (Cur).
pág. 4812
Figura 4. La curcumina incrementa los niveles y la vida media de p53.
A) Se trataron células SiHa y HeLa con 10 μM y 20 μM de curcumina durante 24 h, el incremento de
p53 se detectó mediante western blot. El signo negativo (-) representa las células sin tratamiento. Se
utilizó la prueba de ANOVA seguida de la prueba de Tukey para establecer una diferencia significativa
*p<0.05
B) Se evaluó la vida media de p53 con un experimento de pulso y caza con cicloheximida (CHX) en
una concentración de 50 μg/ml. La extracción de proteínas se realizó cada 10 minutos (0-60) y se reveló
mediante inmunotransferencia, la estabilidad de p53 se evaluó en células control (sin curcumina) y
células tratadas con curcumina.
C) Se evaluó la activación de la vía Keap1/Nrf2 por la translocación de NrF2 al núcleo para ello las
células HeLa y SiHa se trataron con 20 μM de curcumina se realizó el fraccionamiento celular y la
extracción de proteínas de cada fracción Ci representa la fracción citoplasmática y Nu la fracción
nuclear. “Cur” representa el tratamiento con curcumina.
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Figura 4. Expresión de p53 en tumores inducidos in ovo tratados con curcumina.
A) Ambas líneas celulares se colocaron en la membrana corioalantoidea de embrión de pollo (CAM)
para generar tumores que fueron tratados con curcumina (20µM), el control representa a los tumores
sin tratamiento, las flechas blancas señalan los tumores, la barra de escala representa 2 mm.
B) Se midió el eje mayor de los tumores. Se aplicó la prueva t de studen para establecer la diferencia
significativa entre los tumores control vs los que fueron tratados * p<0.05.
C) Secciones de tumores en los que se realizó la inmunodetección de p53. “Cur” representa el
tratamiento con curcumina.
CONCLUSIONES
Nuestros resultados demuestran la importancia de la curcumina como agente natural promotor de la
muerte de células cancerosas, lo cual indica su posible potencial como agente antitumoral, además este
trabajo destaca la importancia de este compuesto en la regulación de la expresión y de la estabilidad de
p53. En nuestro trabajo, las líneas celulares derivadas de tumores HeLa, SiHa tienen p53 de tipo
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silvestre y conservan la vía correspondiente intacta; por lo tanto, la curcumina puede ser un agente
terapéutico potencial como coadyuvante en el tratamiento de tumores con p53 de tipo silvestre, sin
embargo es necesario seguir realizando estudios para elucidar el mecanismo molecular de acción de la
curcumina, así como la realización de estudios en los cuales se de tratamiento con antineoplásicos y
curcumina en conjunto para poder evaluar su papel como coadyuvante terapéutico. Así mismo se
requiere poder escalar los ensayos en modelos más complejos hasta poder llegar a hacer un estudio en
pacientes.
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