TAMIZAJE MOLECULAR DE
ANAPLASMATACEAE MEDIANTE PCR DIRIGIDA
AL GEN 16S RRNA EN CANINOS SINTOMÁTICOS
DE MACHALA, ECUADOR
MOLECULAR SCREENING OF ANAPLASMATACEAE BY
16S RRNA GENE-TARGETED PCR IN SYMPTOMATIC DOGS
FROM MACHALA, ECUADOR
Luis Antonio Bacusoy Gaibor
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
Fernando L. Aguilar Gálvez
Universidad Técnica de Machala, Ecuador
pág. 8487
DOI: https://doi.org/10.37811/cl_rcm.v10i4.25793
Tamizaje Molecular de Anaplasmataceae Mediante PCR Dirigida al Gen
16S rRNA en Caninos Sintomáticos de Machala, Ecuador
Luis Antonio Bacusoy Gaibor1
lbacusoy1@utmachala.edu.ec
https://orcid.org/0009-0000-0223-9822
Universidad Técnica de Machala
Ecuador
Fernando L. Aguilar Gálvez
flaguilar@utmachala.edu.ec
Universidad Técnica de Machala
Ecuador
RESUMEN
Las enfermedades transmitidas por garrapatas representan un desafío diagnóstico en caninos debido a la
similitud de sus manifestaciones clínicas y a la circulación de distintos agentes de la familia
Anaplasmataceae. El objetivo de este estudio fue detectar ADN de Anaplasmataceae mediante PCR
convencional dirigida al gen 16S rRNA en caninos sintomáticos de Machala, Ecuador. Se analizaron 30
muestras de sangre de perros con signos compatibles con enfermedades hemotrópicas transmitidas por
vectores. El ADN total fue extraído de sangre entera y amplificado mediante los cebadores
EHR16SD/EHR16SR, dirigidos a un fragmento de aproximadamente 345 pb del gen 16S rRNA. Once
de las 30 muestras resultaron positivas, con una frecuencia de detección molecular del 36,7 % (IC 95
%: 21,9–54,5 %). No se observaron asociaciones estadísticamente significativas entre la positividad
molecular y la edad, el sexo o la raza (p > 0,05). La PCR dirigida al 16S rRNA demostró utilidad como
herramienta de tamizaje molecular para Anaplasmataceae en caninos sintomáticos; sin embargo, la
identificación definitiva del género o especie requiere secuenciación o ensayos moleculares específicos.
Palabras clave: anaplasmataceae, PCR convencional, 16S rRNA, diagnóstico molecular, caninos
1
Autor principal
Correspondencia: lbacusoy1@utmachala.edu.ec
pág. 8488
Molecular Screening of Anaplasmataceae by 16S rRNA Gene-Targeted
PCR in Symptomatic Dogs from Machala, Ecuador
ABSTRACT
Tick-borne diseases represent a diagnostic challenge in dogs because of the overlap in their clinical
manifestations and the circulation of different members of the family Anaplasmataceae. This study
aimed to detect Anaplasmataceae DNA by conventional PCR targeting the 16S rRNA gene in
symptomatic dogs from Machala, Ecuador. Thirty blood samples were collected from dogs exhibiting
clinical signs compatible with vector-borne hemotropic diseases. Total DNA was extracted from whole
blood and amplified using the EHR16SD/EHR16SR primer pair, targeting an approximately 345-bp
fragment of the 16S rRNA gene. Eleven of the 30 samples tested positive, corresponding to a molecular
detection frequency of 36.7% (95% CI: 21.9–54.5%). No statistically significant associations were
observed between molecular positivity and age, sex, or breed (p > 0.05). PCR targeting the 16S rRNA
gene proved useful as a molecular screening tool for Anaplasmataceae in symptomatic dogs; however,
definitive identification at the genus or species level requires sequencing or additional specific molecular
assays.
Keywords: anaplasmataceae, conventional PCR, 16S rRNA, molecular diagnosis, dogs
Artículo recibido 14 julio 2026
Aceptado para publicación: 21 agosto 2026
pág. 8489
INTRODUCCIÓN
Las garrapatas son vectores de diversos agentes responsables de enfermedades transmitidas por vectores
en perros, entre ellos bacterias de los géneros Ehrlichia y Anaplasma. Ehrlichia canis causa la
ehrlichiosis monocítica canina, mientras que Anaplasma platys infecta las plaquetas y causa
trombocitopenia cíclica canina (Jimenez y col., 2020). Cordeiro y col., (2023) y Jimenez y col., (2020)
señalaron que la infección por E. canis puede manifestarse con letargia, inapetencia, fiebre y pérdida de
peso, además de alteraciones hematológicas como anemia y trombocitopenia. Por su parte, la infección
por A. platys puede presentar signos clínicos leves e inespecíficos, entre ellos letargia y linfadenopatía
generalizada. Asimismo, Lara y col., (2020) indicaron que ambas infecciones pueden presentar
manifestaciones clínicas amplias, inespecíficas y superpuestas, lo que representa una dificultad para su
diferenciación clínica.
En Ecuador se han documentado resultados serológicos y moleculares que evidencian la presencia de
estos agentes en poblaciones caninas. En Santa Cruz, Galápagos, Jimenez y col., (2020) evaluaron 58
perros y reportaron una seropositividad de 48,3 % para E. canis/E. ewingii y de 12,1 % para A.
phagocytophilum/A. platys; mediante PCR, E. canis fue detectada en el 12,1 % de los animales
estudiados. Más recientemente, Culda y col., (2025) y Vargas-Hernandez, y col., (2016) determinaron
una prevalencia molecular de 20,3 % para A. phagocytophilum, mientras que A. platys fue identificada
en el 2,9 % de las muestras. Estos antecedentes evidencian la detección de agentes de los géneros
Ehrlichia y Anaplasma en poblaciones caninas de Ecuador mediante métodos serológicos y moleculares.
Cerro y col ., (2022) señalaron que cuando ambas infecciones están presentes en una misma población
canina, el diagnóstico se hace aún más difícil, por lo que se necesitan métodos que permitan
diferenciarlas. Dado que las infecciones tienen manifestaciones clínicas muy similares, no se puede
identificar la causa mediante la evaluación clínica sola (Macedo, y col., 2022). Cabrera-Jaramillo y col.,
(2022) y Almazán y col., (2016) demostraron que la PCR permite detectar ADN bacteriano en muestras
clínicas y, según los cebadores utilizados, orientar la amplificación hacia géneros o especies
determinadas. Este enfoque ha sido empleado para la detección molecular de Ehrlichia y Anaplasma en
perros y para la posterior identificación específica de los agentes amplificados. Abarca y col., (2007)
utilizaron una primera amplificación dirigida a miembros de Anaplasmataceae y ensayos posteriores
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con cebadores específicos para diferenciar especies, entre ellas E. canis y A. platys. La selección de
cebadores y de la región genética diana determina, por tanto, el nivel taxonómico al que pueden
interpretarse los productos obtenidos mediante PCR. Se ha documentado molecularmente la presencia
de E. canis en pacientes caninos con signos clínicos compatibles con la ehrlichiosis monocítica canina
en Machala (Correa-Vivanco y col., 2024; Alhassan, y otros, 2021). Sin embargo, para diferenciar
Ehrlichia de Anaplasma en una población clínica homogénea se requieren técnicas que ayuden a
diferenciar entre ambos géneros y que permitan identificar específicamente la presencia de E. canis. Por
tanto, el objetivo de este estudio fue detectar ADN de bacterias de la familia Anaplasmataceae mediante
PCR convencional dirigida al gen 16S rRNA en caninos sintomáticos con sospecha clínica de
enfermedades transmitidas por garrapatas en Machala, Ecuador.
METODOLOGÍA
Diseño del estudio y población
Se realizó un estudio descriptivo de detección molecular en 30 caninos atendidos en la ciudad de
Machala, provincia de El Oro, Ecuador. Los animales correspondieron a diferentes edades, sexos y razas
y fueron seleccionados por presentar signos clínicos compatibles con enfermedades hemotrópicas
transmitidas por vectores. La información clínica y epidemiológica se registró mediante una ficha
estandarizada que incluyó identificación del paciente, antecedentes clínicos, exposición a vectores y
características del entorno.
Recolección y conservación de las muestras sanguíneas
Las muestras de sangre se obtuvieron mediante venopunción de la vena cefálica utilizando material
estéril. Se recolectaron aproximadamente 0,5–1,0 mL de sangre por animal y se transfirieron
inmediatamente a tubos con EDTA, previamente identificados. Las muestras se transportaron al
Laboratorio de Citogenética de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de
Machala (UTMACH) en un contenedor refrigerado con acumuladores de frío y se mantuvieron bajo
refrigeración hasta su procesamiento molecular.
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Extracción y cuantificación del ADN
El ADN total se extrajo a partir de 50 µL de sangre entera mediante el Quick-DNA™ Microprep Kit
(Zymo Research, Irvine, CA, USA; Cat. No. D3021; lote 256484), utilizando columnas Zymo-Spin™
IC y siguiendo el protocolo del fabricante. Brevemente, las muestras se lisaron con 200 µL de Genomic
Lysis Buffer; el lisado se transfirió a la columna de purificación y se centrifugó a 10 000 × g durante 1
min. La columna se lavó secuencialmente con 200 µL de DNA Pre-Wash Buffer y 500 µL de g-DNA
Wash Buffer. Finalmente, el ADN se eluyó en 10 µL de DNA Elution Buffer después de una incubación
de 2–5 min a temperatura ambiente y se almacenó a ≤−20 °C hasta su utilización. La concentración del
ADN extraído se determinó mediante un fluorómetro Quantus™ (Promega Corporation). Todas las
muestras fueron trabajas entre 50 a 200 ng de DNA total por corrida de PCR.
Detección molecular mediante PCR convencional
La detección molecular se realizó mediante PCR convencional dirigida a un fragmento de
aproximadamente 345 pb del gen 16S rRNA de miembros de la familia Anaplasmataceae. Se utilizaron
los cebadores EHR16SD (5′-GGT ACC YAC AGA AGA AGT CC-3′) y EHR16SR (5′-TAG CAC TCA
TCG TTT ACA GC-3′), previamente descritos para el tamizaje molecular de Anaplasmataceae
(Inokuma y col., 2000). Cada reacción se preparó en un volumen final de 25 µL, compuesto por 12,5
µL de PCR Master Mix 2× (abm, Cánada), 0,6 µL de cada cebador (10 pmol/µL), 8,3 µL de agua de
grado molecular y 3,0 µL de ADN molde.
La amplificación se efectuó en un termociclador TECHNE Progene (Reino Unido) con una
desnaturalización inicial a 95 °C durante 5 min, seguida de 34 ciclos de 95 °C durante 30 s, 55 °C
durante 30 s y 72 °C durante 90 s, y una extensión final a 72 °C durante 5 min.
Electroforesis y visualización de los productos de PCR
Los productos de amplificación se separaron mediante electroforesis en geles de agarosa al 1,5% (p/v)
preparados en tampón TAE. Para cada muestra se cargaron 5 µL del producto de PCR y se incluyó un
marcador de peso molecular. La electroforesis se realizó a 100 V durante 15–20 min y los productos se
visualizaron en un transiluminador. La presencia de una banda de aproximadamente 345 pb se consideró
compatible con amplificación del blanco 16S rRNA esperado.
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se analizaron muestras sanguíneas de 30 caninos atendidos en la ciudad de Machala, seleccionados por
presentar signos clínicos compatibles con enfermedades hemotrópicas transmitidas por vectores.
Mediante PCR convencional dirigida al gen 16S rRNA, 11 de las 30 muestras (36,7%; IC 95%: 21,9–
54,5%) mostraron amplificación del fragmento esperado de aproximadamente 345 pb, mientras que 19
muestras (63,3%) no presentaron amplificación detectable.
Figura 1
Detección molecular de Anaplasmataceae dirigida al gen 16S rRNA. Los carriles M1–M8 corresponden
a muestras clínicas; L, marcador de peso molecular; CP, control positivo; y CN, control negativo. La
presencia de una banda de aproximadamente 345 pb se consideró compatible con amplificación del
fragmento esperado del gen 16S rRNA de Anaplasmataceae (M3 y M8).
La detección de ADN compatible con miembros de la familia Anaplasmataceae demuestra la presencia
de estos agentes en la población clínica evaluada y aporta evidencia molecular de su circulación en
perros sintomáticos de Machala. Este hallazgo es consistente con investigaciones previas realizadas en
el sur del Ecuador. Vásquez Borja y col., (2024), en un estudio desarrollado en el cantón Ponce Enríquez
con participación de Aguilar Gálvez, detectaron mediante PCR Ehrlichia canis en 14 de 45 perros
previamente positivos por inmunocromatografía. En Santa Cruz, Galápagos, Jimenez y col., (2020)
analizaron 58 perros y detectaron mediante PCR E. canis en el 12,1 % de los animales, además de
documentar seropositividad para E. canis/E. ewingii y A. phagocytophilum/A. platys. Por otra parte,
Culda y col., (2025), mediante el análisis molecular de 1.221 perros procedentes de cuatro islas de
Galápagos, reportaron una prevalencia molecular de 20,3 % para A. phagocytophilum y detectaron A.
platys en el 2,9 % de las muestras.
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No obstante, las frecuencias de detección en estos estudios no son directamente comparables, debido a
que en aquel trabajo los animales fueron preseleccionados mediante una prueba serológica, mientras que
en el presente estudio la inclusión se basó exclusivamente en la presencia de signos clínicos compatibles
con enfermedades transmitidas por vectores.
Asimismo, Chalco-Torres y col., documentaron molecularmente una coinfección por Ehrlichia canis y
Ehrlichia ewingii en un perro en Ecuador, lo que evidencia que diferentes miembros de
Anaplasmataceae pueden circular en el contexto regional. De manera complementaria, Cañar-Romero
y col., detectaron ADN de Ehrlichia canis en 18 de 34 perros seropositivos evaluados mediante PCR
convencional.
En conjunto, estos antecedentes respaldan la utilidad de las herramientas moleculares para investigar
infecciones transmitidas por garrapatas en poblaciones caninas del país, aunque las diferencias en
criterios de selección, blancos moleculares y pruebas diagnósticas limitan la comparación directa de las
frecuencias reportadas.
Debe considerarse que el par de cebadores EHR16SD/EHR16SR reconoce una región conservada del
gen 16S rRNA en diferentes miembros de Anaplasmataceae. En consecuencia, las 11 muestras positivas
deben interpretarse como detección molecular a nivel de familia y no como identificación definitiva de
Anaplasma spp. o Ehrlichia spp. La asignación taxonómica a nivel de género o especie requiere la
secuenciación de los amplicones o la aplicación de ensayos moleculares adicionales con mayor
especificidad.
No se identificaron asociaciones estadísticamente significativas entre la detección molecular de
Anaplasmataceae y las variables edad, sexo o raza (p > 0,05). Este patrón coincide con lo descrito por
Vásquez Borja y col., para perros evaluados por Ehrlichia canis en Ponce Enríquez, donde tampoco se
observaron asociaciones significativas con estas variables. Sin embargo, la ausencia de significancia
estadística no debe interpretarse como evidencia de ausencia de efecto biológico. El tamaño muestral
del presente estudio (n = 30), junto con la selección clínica de los animales y la posible distribución
desigual entre categorías, limita la potencia estadística para detectar asociaciones de magnitud
moderada.
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La exposición a bacterias de la familia Anaplasmataceae depende además de factores relacionados con
la ecología del vector y el manejo animal, entre ellos la infestación por garrapatas, el uso de
ectoparasiticidas, las condiciones de alojamiento, el historial de exposición y la circulación local de los
agentes. Estas variables podrían explicar mejor la heterogeneidad de la detección que características
individuales como sexo, edad o raza y deberían incorporarse en estudios posteriores con mayor tamaño
muestral. Finalmente, los signos clínicos asociados con enfermedades transmitidas por garrapatas son
inespecíficos y pueden solaparse entre diferentes agentes etiológicos. Por ello, la selección de perros
sintomáticos incrementa la sospecha clínica, pero no permite establecer por sí sola la etiología. Los
resultados obtenidos respaldan el uso de la PCR dirigida al 16S rRNA como herramienta de tamizaje
molecular; sin embargo, la caracterización de los amplicones positivos será necesaria para determinar
los géneros y especies de Anaplasmataceae circulantes en los caninos de Machala.
CONCLUSIONES
La PCR convencional dirigida al gen 16S rRNA detectó ADN de Anaplasmataceae en 11 de 30 caninos
sintomáticos (36,7%) de Machala, Ecuador. No se observaron asociaciones significativas entre la
detección molecular y la edad, el sexo o la raza de los animales (p > 0,05). El empleo de un blanco
conservado permite una detección amplia de miembros de Anaplasmataceae, lo que representa una
ventaja como estrategia inicial de diagnóstico molecular en la práctica clínica veterinaria. Sin embargo,
la identificación definitiva a nivel de género o especie requiere complementar el tamizaje con
secuenciación o ensayos moleculares específicos. Este enfoque puede contribuir a fortalecer el
diagnóstico etiológico y la vigilancia de agentes transmitidos por vectores en caninos de la región.
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