INTRODUCCIÓN
La inflamación es una
respuesta frecuente e inmediata a estímulos nocivos externos e internos
incluyendo infecciones, productos químicos, estrés físico, y patologías
inmunes, siendo un fenómeno complejo que implica la acción de diferentes tipos de células y vías celulares
1. Durante el proceso inflamatorio se activan nociceptores,
inducción de la vasodilatación y reclutamiento celular de células activas por
el sistema inmune 2.
Los estrógenos son hormonas esteroides sexuales
que están presentes tanto en hombres como en mujeres, pero circulan a niveles
significativamente más altos en las mujeres durante la edad reproductiva; los
estrógenos endógenos incluyen estrona (17α-E2), 17β-estradiol (E2) y estriol
(E3)3. Niveles menores de estrógenos de mujeres mayores inducen una
respuesta proinflamatoria más fuerte en comparación con los hombres debido a la
senescencia del sistema inmune que conduce a una inflamación crónica de bajo
grado 4.
El perfil inmunológico alterado en mujeres
menopáusicas ha sido relacionado independientemente con cambios de los niveles
fluctuantes naturales de estrógenos del cuerpo, a través de la extirpación
quirúrgica de los ovarios, la menopausia natural o la administración de
estrógenos exógenos17. Mujeres a las que se les han extirpado los
ovarios, así como los que se encuentran en la menopausia natural, exhiben
sistemáticamente inflamación 19. La disminución de la concentración
de estrógenos durante la menopausia se correlaciona con un número reducido de
células B y T y una mayor secreción de citocinas proinflamatorias 5
Además, se han encontrado niveles elevados de
marcadores proinflamatorios como la interleucina-1 (IL-1) y el factor de
necrosis tumoral-α (TNF-α) en mujeres a las que se les extirparon los ovarios
quirúrgicamente 20. Los niveles de marcadores proinflamatorios
interleucina-6 (IL-6), IL-1, TNF-α aumentan significativamente en mujeres
menopáusicas cuando disminuye la síntesis de E2 21.
Los fitoestrógenos, en especial las
isoflavonas; se caracterizan por tener una estructura química similar a los
estrógenos; están conformados por varios grupos hidroxilo y un grupo aromáticos
6-8. Son las isoflavonas las que tienen afiliación con los
receptores estrogénicos de tipo alfa y beta, estando en mayor grado los
segundos 9.
De forma que las isoflavonas tienen mayor
efecto en tejidos como el hueso, el sistema nervioso central y el endotelio
vascular; ya que presentan una cantidad en alto grado de los receptores beta. 10.
El aguaje Mauritia flexuosa L, es una palmera
que se encuentra altamente distribuido en países del hemisferio sur, de clima
tropical, que se encuentra creciendo en territorios como Perú; siendo un
alimento que se distribuye en muchas familias amazónicas 11. En
vista de que este fruto tiene como componente a los fitoestrógenos, es que
cierto sector de la población amazónica le atribuye el poder de influir en la
manifestación de los caracteres sexuales femeninos y cómo contribuye
positivamente frente a los síntomas de la menopausia; sin embargo la acción de
los fitoestrógenos es menor en comparación con los estrógenos 12.
Siendo así que esta fruta es usada en etapas postmenopáusicas y además, no ha
reportado efectos adversos como la Terapia de Reemplazo Hormonal (TRH) como los
son los accidentes cerebro vasculares, enfermedades coronarias así como
favorecer el desarrollo de cáncer de mama y endometrio 13-15.
El objetivo del trabajo fue determinar el
efecto antiinflamatorio de los fitoestrógenos del aguaje (Mauritia flexuosa) en
ratas ovariectomizadas.
MATERIAL
Y MÉTODOS
El tipo de investigación es experimental, transversal, en donde las
unidades de estudio fueron las Ratas Hembras Wistar de 45 días a 3 meses,
siendo la muestra de 20. La asignación del grupo fue en aleatorio simple;
teniendo como variable independiente al extracto hidroalcohólico del fruto del
aguaje y la variable dependiente el efecto anti inflamatorio.
Procedimiento
Preparación del extracto hidroalcohólico del
fruto de aguaje (EHA): Se adquirió 6kg de aguaje, en
el mercado San Camilo (Arequipa). Los frutos fueron desinfectados, lavados con
agua potable y luego remojados en agua caliente por 4 horas en recipientes de
acero con la finalidad de acelerar el proceso de maduración, hasta que el
pericarpio pudiera retirarse con la yema de los dedos sin mayor esfuerzo 16.
Grafico 1
Aguaje (Mauritia
Flexuosa)
Se separó la pulpa para la preparación del
extracto. Cada 200 g de pulpa fueron licuados con 450 ml de alcohol al 70%.
Esta mezcla se depositó en un envase ámbar herméticamente cerrado por una
semana para su maceración; posteriormente se procedió a su filtración, para lo
cual se utilizó una bomba de filtración al vacío. El filtrado fue llevado al
rotavapor para extraer el alcohol, luego el líquido se depositó en placas Petri
de vidrio que fueron puestas en una estufa a 40°C por 4 semanas para la evaporación
de la parte líquida y así obtener el extracto seco. Para la preparación de las
3 concentraciones de EHA se pesó el extracto seco y se diluyó con NaCl 16.
Gráfico 2
Extracto de aguaje (Mauritia Flexuosa) en el rotavapor
Gráfico 3
Extracto
de aguaje (Mauritia Flexuosa) colocado en la estufa
Preparación y agrupación de los animales: Las ratas hembra fueron adquiridas de la
UCSM. Fueron alojadas en jaulas de crianza en el Bioterio de la universidad y
alimentadas diariamente, además de contar con agua ad libitum. Los animales
permanecieron en un ambiente de 20 a 22 ºC de temperatura, 50 a 60% de humedad
y ciclo de luz/ oscuridad 12:12. Luego se asignaron aleatoriamente los 4 grupos
de estudio:
§ Grupo 1
(n=5): ratas hembras intactas + NaCl 1ml/100 gr
§ Grupo
2 (n=5): ratas OVX + Etinilestradiol 50 um/kg
§ Grupo
3 (n=5): OVX + EHA de 300 mg/kg
§ Grupo
4 (n=5): OVX + EHA 500 mg/kg
Ovariectomía
(OVX): La ovariectomía (hembras de 45 días; (Gordon y
Soliman, 1994)), previo rasurado del área lumbar lateral, se realizó a través
de incisiones bilaterales de 1 cm aproximadamente para ubicar el ovario de
dicha zona. Los paquetes de ovarios se ataron con suturas de seda 4-O y se
extrajeron los ovarios. La fascia y la piel se cerraron con suturas de seda
4-O. Los procedimientos se llevaron a cabo bajo anestesia inducida por una
inyección I.M. de una mezcla de ketamina (55 mg / kg) y xilazina (5,5 mg / kg).
Se utilizaró la inyección de ketoprofeno SC (5 mg / kg) para la analgesia
postoperatoria (Roughan y Flecknell, 2000).
Grafico
4
Extracción
de ovarios
Cuantificación de la inflamación: Recibido el tratamiento (2 semanas de EHA y 1 semana de
etinilestradiol), a cada grupo de ratas se les provocó inflamación en sus
miembros inferiores. Se inyectó 0,1 mL de carragenina al 1% en la superficie de
una pata trasera para conseguir los datos en el incremento del diámetro del
miembro inferior con ayuda del micrómetro. El edema fue expresado como el
incremento del diámetro de la pata inflamada en mm y se midió a los 30, 60,
120, 180 minutos.
Gráfico
5
Inyección
de carragenina
Gráfico 6
Medición
de la Inflamación con el micrómetro
RESULTADOS
Tabla N° 1
Efecto de la carragenina sobre los diferentes grupos de estudio
Usando la Prueba estadística Anova se observa
que la inflamación producida por la carragenina se eleva y luego va
disminuyendo progresivamente.
Tabla N° 2
Efecto de la carragenina sobre los diferentes grupos de estudio
Usando el Método de Dunn se observa que las
diferencias en los valores medianos entre los grupos de tratamiento son mayores
de lo que se esperaría; hay una diferencia estadísticamente significativa (P =
<0.01)
DISCUSIÓN
La Mauritia flexuosa (Aguaje), es el fruto
selvático de una de las palmeras más resistentes y cuantiosas en el Perú y en
toda Sudamérica, dentro de los cuales destacan sus compuestos, los
fitoestrogenos; quienes cumplen funciones en contra la menopausia, disminución
de la incidencia de enfermedades cardiovasculares, ateroesclerosis, así como
también un efecto antiinflamatorio. En cuanto a lo que es fitoestrogenos, se ve
que hay una variedad en el contenido de isoflavonas siendo dos de estas la
biocanina A y la Genistein que se encuentran en mayor cantidad en el aguaje 16
.
Según Corina Danceu y Tefana Avram mencionan
que los isoflavonoides son candidatos interesantes como agentes
antiinflamatorios implicados en la modulación de procesos inflamatorios:
actividades de eliminación de radicales, regulación de actividades enzimáticas
de ácido araquidónico y el óxido nítrico, reducción de estímulos pro
inflamatorios. Siendo necesario un mayor esclarecimiento de estos mecanismos.
Ademas Hämäläinen menciona el efecto inhibidor
de la genistein contra la sintasa inducible del óxido nítrico (iNOS), el oxido
nítrico (NO) y la COX2; con un resultado similar de mecanismo antiinflamatorio.
En el estudio de Amorim VR, Rodrigues DC et al,
se examinó la actividad antiinflamatoria del epicarpio, mesocarpio y endocarpio
obtenido de frutos de M. flexuosa La acción antiedematogénica se determinó
usando agentes flogísticos para inducir edema de la pata y peritonitis. Se
encontró que el edema inducido por carragenina disminuyó en ratones pretratados
con epicarpio al igual que en nuestro estudio se observó la diminución de la
inflamación 18
En el trabajo de Campos Karen y Gutierrez
Cynthia , se investigó la actividad estrogénica del extracto hidroalcohólico
del fruto de aguaje (Mauritia flexuosa L) en ratas ovariectomizadas. Este
estudio demostró que el grupo que recibió la dosis de 500 mg/kg presentó mayor
maduración celular vaginal a diferencia de las dosis menores y como conclusión
obtuvo que el extracto hidroalcohólico del fruto de aguaje presentó actividad
estrogénica en ratas ovariectomizadas en las células vaginales; a diferencia del
nuestro que estudia el aguaje pero el efecto antiinflamatorio 16
En la tesis elaborada por Carmen Cusco de la
UNMSM, se realizó una investigación fitoquímica y farmacológica del extracto
metanólico de Mauritia flexuosa L. ̈Aguaje ̈, con el objetivo de determinar
compuestos fenólicos que posee el fruto de esta especie y su actividad
estrogénica. Los resultados de la marcha fitoquímica muestran que el extracto
metanólico de Mauritia flexuosa L. ̈Aguaje ̈ presenta en su composición
abundante cantidad de compuestos fenólicos, flavonoides, taninos y alcaloides.
El estudio farmacológico realizado determinó que el extracto metanólico de
Mauritia flexuosa L ̈aguaje ̈ utilizado disminuyó el nivel hormonal de
estradiol sobre los valores normales en las ratas tratadas produciendo efecto
antiestrogénico, a diferencia de nuestro estudio que propone que tiene un
efecto estrogénico. 12
En la tesis de Rosmeri Jara Horna (Universidad
Católica Los Ángeles de Chimbote) se investigó el efecto del extracto
metanólico del fruto de Mauritia Flexuosa l. F (aguaje) en el aprendizaje y
memoria espacial en rattus ovariectomizadas donde se concluyó que el extracto
metanólico del fruto de Maurita flexuosa L.f (Aguaje) a dosis de 50mg/kg/día y
25mg/kg/día. presenta efecto en el desarrollo del proceso cognitivo en el
aprendizaje y memoria espacial 22.
Esto podría deberse a que los niveles bajos de
estrógenos se han implicado en la etiología de la demencia en mujeres 23 ; por ejemplo, hay una mayor proporción de mujeres
con enfermedad de Alzheimer que de hombres y un mayor riesgo de demencia en
mujeres que se han sometido a una extirpación quirúrgica de los ovarios a una
edad temprana Sin embargo, otro posible mecanismo para el deterioro
cognitivo podría ser la inflamación del cerebro debido a la respuesta del
sistema inmunitario a la disminución de los niveles de E2 24.
CONCLUSIONES
El estudio muestra que los fitoestrógenos del
aguaje (Mauritia flexuosa) demostraron tener un efecto anti inflamatorio en
ratas ovariectomizadas. Por lo que es recomendable que estudios posteriores
puedan dilucidar en qué marcadores proinflamatorios actuaría para poder regular
estas vías.
Agradecimientos
Al Dr. Henry Diaz (QEPD) por incentivarnos en la
investigación formativa en el curso de Fisiología II, a la Dra. Karla Torres
por asesorarnos y acompañarnos en todos los procedimientos, al Sr José del
Bioterio por su paciencia, a la Dra Yulitza por permitirnos usar los equipos
del laboratorio de Farmacia y Bioquímica, a la Dra Karim Vera por resolver
nuestras dudas, al Dr del Carpio por apoyarnos con algunos insumos, a los
encargados del laboratorio Sr. Vargas, Gary y César por todo su apoyo y
comprensión y a todos las personas que nos apoyaron desde el inicio hasta la
culminación de esta investigación.
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