Identificación de ω-aminotransferasa en células completas de Fusarium oxysporum: pH, temperatura y afinidades de (R)-(-)-(α)-metilbencilamina y piruvato de sodio
Resumen
La demanda de compuestos quirales e intermediarios que utilizan tecnología enzimática ha aumentado en la industria farmacéutica. En la elaboración de aminas enantioméricamente puras está aumentando la relevancia de las ω-aminotransferasas esto por su enantioselectividad que se utilizan para síntesis de aminas quirales. En este trabajo se ensayaron células completas de Fusarium oxysporum con la reacción de transaminación. El resultado de la prueba de transaminación mostró actividad correspondiente a R-Aminotransferasa. La prueba de aminotransferasa se llevó a cabo en un volumen de 50 mL, utilizando la mezcla de reacción compuesta por 15 mM de (R)-(-)-(α)-Metilbencilamina, piruvato sódico 100 mM y 1 mM piridoxal-5-fosfato. La actividad de las aminotransferasas se midió directamente con la velocidad de reacción inicial de producción de acetofenona. Se prepararon cultivos celulares de F. oxysporum y se pusieron en contacto con nitrógeno líquido para liberar la enzima. Se utilizó una masa de 1.2 g de lisado de F. oxysporum para seleccionar valores adecuados de temperatura y pH. La temperatura óptima fue 32.5 ° C y el pH fue 6.28, mostrando una velocidad de reacción de 6 µM/min. El piruvato de sodio presento una km de 9.55 mM y la (R)-(-)-(α)-Metilbencilamina una km de 2.27 mM.
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Citas
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